ПЦР
ПЦР – цепная полимеразная реакция, представляет собой уникальный метод диагностики различных инфекционных состояний, основанный на определении стабильного фрагмента молекулы ДНК вирусного, грибкового, протозойного и бактериального агента.
Основа ПЦР-диагностики - это воспроизведение (репликация) в лабораторных условиях огромной массы молекул ДНК инфекционного агента, который содержится в исследуемом образце. Для анализа применяются различные биологические жидкости и ткани организма (слюна, кровь, моча, сперма, соскобы эпителиальных клеток, аспираты и биоптаты).
Преимуществами ПЦР являются ее высокая специфичность и чувствительность. Процент ложноположительных результатов крайне мал. Еще одной особенностью считается тот факт, что в одном относительно малом количестве биоматериала можно одновременно проводить большой спектр исследований. Цепная полимеразная реакция в настоящее время применяется практически во всех отраслях медицины. Наибольшее распространение она получила в гинекологии, урологии, венерологии, гепатологии. И, конечно же, метод широко применятся в клинике инфекционных болезней.
В практической медицине чаще всего используется для диагностики хламидиоза, микоплазмоза, уреаплазмоза, гонореи, трихомониаза, грибковых инфекций (кандидоза), сифилиса, папилломавирусной инфекции, цитомегаловируса, герпеса, туберкулеза, вируса Эпштейн-Барра, гепатитов групп A, B,C, D, E и ВИЧ-инфекции.
Технология ПЦР достаточно сложна и включает в себя несколько этапов. Под действием фермента ДНК-полимеразы происходит многократное копирование стабильного фрагмента ДНК агента, после чего становится возможным его обнаружение. В ходе одной реакции происходят около 30 циклов репликации. Постоянно растущая масса молекул ДНК на заключительном этапе идентифицируется (путем гель-электрофореза), что дает возможность говорить о присутствии в исследуемом образце того или иного инфекционного агента.
Специальной подготовки для исследования не требуется. Стоит лишь сказать, что забор крови лучше проводить натощак. При анализе соскобов из уретры у мужчин рекомендуется временно воздержаться от мочеиспускания в течение 2-3 часов. Женщинам не стоит проводить спринцевание влагалища и применять антисептики и лечебные влагалищные свечи. После сомнительного полового акта диагностику необходимо провести через 2-3 суток.
Полученный материал вносится в специальную пробирку с транспортной средой, маркируется и перемещается в лабораторию. Сроки проведения анализа не превышают 48 часов. Если нет возможности изучаемый биоматериал отправить в лабораторию, то его могут заморозить и хранить длительное время.
Наиболее современной методикой классической ПЦР-реакции является метод ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR). Он основан на постоянном мониторинге роста молекул ДНК, автоматизации процесса регистрации и детекции копий. Данный способ позволяет максимально сократить стоимость исследования, а также сроки анализа.
